Назад к статьям
Обзорная статья

Изучение механизма действия и эффективности применения БАД на основе овомукоида из перепелиных яиц

Лебедева Наталья Владимировна, врач аллерголог-иммунолог, к.м.н. Центральная клиническая больница Российской академии наук
Аллергический ринит (АР) относится к широко распространенным заболеваниям. За последние десятилетия во всех экономически развитых странах отмечено увеличение числа больных АР. Следует отметить, что АР не является столь безобидным заболеванием, как считалось ранее, поскольку симптомы ринита причиняют неудобства пациенту, значительно снижая качество его жизни.

Введение.

АР относится к широко распространенным заболеваниям [1, 2]. По данным эпидемиологических исследований, проведенных в разных странах, распространенность АР составляет от 1 до 40%.[1, 3, 4]. Эпидемиологические исследования, проведенные в разных регионах России, показали, что частота АР колеблется от 12 до 24% [2].

Следует отметить, что АР является не столь безобидным заболеванием. Во-первых, симптомы ринита причиняют дискомфорт пациенту, снижают его работоспособность, качество жизни, нарушает сон. Во-вторых, АР является фактором риска для развития других заболеваний (например, бронхиальная астма). В-третьих, заслуживает внимания социально-экономическая значимость АР. Так, ежегодные затраты, связанные с диагностикой и лечением больных с АР, составляют в Европе 1,5-2 млрд евро, в США — 5,6 млрд долларов. Количество пропущенных вследствие заболеваемости АР школьных дней в США превышает 2 млн в год [5].

АР характеризуется аллергическим IgE-опосредованным воспалением слизистых оболочек носа и проявляется чиханием, зудом в полости носа, выделениями из носа и затруднением носового дыхания. Аллергическое воспаление формируется после контакта с аллергенами, среди которых самыми распространенными являются респираторные аллергены из домашней пыли, пыльцы растений, а также эпидермальные и грибковые аллергены [1].

Основным механизмом аллергического ринита является аллергическая реакция немедленного типа. При первом попадании в организм аллергены воздействуют на плазматические клетки. Они синтезируют специфические IgE-антитела, которые в дальнейшем связываются с особыми рецепторами на мембране тучных клеток и базофилов. При повторном попадании аллергена в сенсибилизированный организм происходят соединение аллергена с соответствующими аллерген-специфическими IgE-антителами, активация тучных клеток и высвобождение из них биологически активных веществ, в первую очередь гистамина, лейкотриенов, простагландинов, клинически проявляющееся зудом в полости носа, чиханием, ринореей, заложенностью носа [1,5].

Cовременная концепция лечения аллергического ринита включает в себя проведение элиминационных мероприятий (прекращение контакта с виновными аллергенами), осуществление фармакологического контроля и специфической иммунотерапии у больных с АР [6,7]:

Аллергенспецифическая иммунотерапия аллергенами (АСИТ) основана на введении в организм минимального количества «причинного» аллергена в постепенно возрастающей дозе. Это позволяет организму выработать защитные блокирующие антитела, что приводит к уменьшению или полному исчезновению симптомов АР. Ограничениями данного метода являются необходимость проведения неоднократных длительных курсов терапии, возможность проведения АСИТ только в период ремиссии АР, а также широкий перечень противопоказаний.

Фармакологический контроль осуществляется за счет симптоматической терапии препаратами различных фармакологических групп с целью воздействия на разные звенья патогенеза аллергической реакции [7, 8]. Следует отметить, что каждый из методов медикаментозного лечения имеет свои ограничения.

Прием топических сосудосуживающих препаратов быстро приводит к развитию тахифилаксии (постоянная потребность в увеличении дозы). Кроме того, длительное лечение данными средствами только усугубляет отек слизистой носа, приводит к развитию медикаментозного ринита.

Кромоны (стабилизаторы тучных клеток) — также широко применяются при лечении АР. Однако, отличительной особенностью данных препаратов является медленный, и зачастую недостаточный клинический эффект.

Влечении АР важное место принадлежит антигистаминным (АГ) препаратам. Механизм их действия основывается на предупреждении патологических эффектов гистамина, который высвобождается из тучных клеток и базофилов в ранней фазе аллергической реакции. Следует помнить о том, что антигистаминные препараты первого поколения обладают седативным и холинолитическим эффектами, а у антигистаминных препаратов второго поколения отмечен кардиотоксический эффект [7,8].

На сегодняшний день наиболее эффективным и безопасным методом терапии АР является применение топических кортикостероидных препаратов. Средства данной группы характеризуются относительно медленным началом действия — максимальный эффект развивается через несколько дней или недель, поэтому необходимо их длительное применение — в течение 4–6 месяцев.

Системные ГКС (перорально или парентерально) уменьшают выраженность симптомов АР, но, учитывая возможность развития системных побочных эффектов, их применение в лечение АР весьма ограничено.

Однако, несмотря на большой и разнообразный выбор лекарственных средств различного механизма действия, полного контроля над течением АР добиться пока не удается. В связи с этим продолжается исследование и разработка новых продуктов, направленных на снижение клинических проявлений АР.

Основываясь на эмпирических наблюдениях еще в 70-х гг. прошлого века французский врач общей практики заметил, что у фермеров, разводящих перепелов (Coturnix coturnix), наблюдается меньше проявлений симптомов аллергии, чем у других людей, проживающих в той же области, но не имеющих контакт с перепелами. С целью подтверждения своих предположений, он давал своим пациентам с аллергическими заболеваниями сырые перепелиные яйца и отмечал снижение симптомов аллергии [9, 10].

Вдальнейшем была проведена серия клинических исследований, результаты которых подтвердили эти предположения. Применение порошка из перепелиных яиц приводило к уменьшению клинических проявлений аллергии при хорошей переносимости.

Позднее проводились доклинические исследования in vitro и исследования на животных с целью определения основных активных действующих веществ и описания механизма действия сырья перепелиных яиц. Исследователи предположили, что эффект овомукоидов и овоингибиторов, входящих в состав перепелиных яиц, опосредован ингибированием протеаз серина [10]. Ферменты протеазы, входящие в состав некоторых аллергенов, при контакте со слизистой оболочкой полости носа могут повреждать ткани и потенцировать IgE-опосредованное воспаление. Таким образом, блокируя сериновые протеазы, овомукоиды препятствует запуску аллергической реакции, иными словами выступают в качестве защитного барьера против экзогенных аллергенов. Также были получены данные о хорошей переносимости и безопасности (отсутствие мутагенного и генотоксического эффекта) пищевых добавок на основе перепелиных яиц [11].

Материалы и методы

Внастоящем обзоре представлена информация по результатам проведенных доклинических (in vitro) исследований по изучению влияния овомукоидов из перепелиных яиц на активность сериновых протеаз аллергенов [12,13], а также данные клинического исследования по оценке эффективности применения БАД на основе овомукоида у пациентов с АР [14].

Проведен анализ отчета по результатам исследования Stragen Pharma SA, «Доказательство концепции исследования действия овомукоидов из перепелиных яиц», 2014., а также ряда публикаций и научных работ [8].

Доклинические исследования

Цель первой части исследования Stragen Pharma SA состояла в демонстрации действия пищевой добавки на аллергены с помощью определения подавляющего влияния порошка из перепелиных яиц на экзогенные протеазы серина, образуемые аллергенами.

Исследование влияния овомукоида на протеазы серина основано на измерении деградации субстрата с помощью каталитической реакции сериновой протеазы, соответствуя ферментативной кинетике реакции. Он был выполнен с бычьим трипсином, с одной стороны, и сериновыми протеазами аллергенов - с другой. Субстрат сериновой протеазы, используемый в этом тесте - гидрохлорид этилового эфира N-α-бензоил-L-аргинина (BAEE): в присутствии трипсина или трипсиноподобного фермента (например, сериновых протеаз аллергенов), он образует N-α– бензоил-L-аргинин (BLA), который имеет максимум спектра поглощения при 253 нм. Если активность трипсина подавляется, скорость образования BLA будет снижена, и его поглощение при 253 нм будет увеличиваться с разной скоростью, в зависимости от того, присутствует овомукоид или его нет.

  • Исследование с бычьим трипсином.

    Трипсин не имеет никакой особой роли в аллергии, но он используется в качестве модели для испытания, и в качестве стандарта для контроля.

    СнизТоп
    Рисунок №1. Изменение абсорбции BLA с трипсином и различными концентрациями овомукоида

    На рисунке 1 представлены кривые коэффициента поглощения трёх инкубаций, содержащих трипсин и BAEE: одна без овомукоида и две — в присутствии овомукоида (1,25 мкг / мл и 5 мкг / мл). Активность трипсина значительно ниже в образцах, содержащих овомукоид: без овомукоида она составила 45% , с овомукоидом 7,2% и 9,0% в концентрации 5 мкг / мл и 1,25 мкг / мл соответственно [12].

  • Тест с сериновыми протеазами аллергенов

    Сериновые протеазы, используемые для этого теста, были получены из аллергенов Der p 3, Der p 6, Der p 9 or Der f 6 (пылевые клещи) 500 мкг. Тест был выполнен в течение 2 часов при температуре 37°С для того, чтобы оценить активность серина протеазы из возникшего аллергена в присутствии овомукоида.

    Снижение активности можно увидеть при значениях концентрации овомукоида 2 мкг/мл и 20 мкг/мл, активность составляла 22,8% и 12,3% соответственно, по сравнению с 40,7% — без овомукоида. Эти значения соответствуют предыдущим тестам и данным литературы [12].

Таким образом, можно сделать вывод, что овомукоиды, извлеченные из порошка перепелиных яиц, оказывают ингибирующее действие на ферментативную активность сериновых протеаз, выделенных из аллергенов.

Растворы овомукоида в концентрациях 1,25 мкг/мл и 5 мкг/мл имели почти одинаковое ингибирующее действие на трипсин. Однако, наблюдалось дозазависимое различие ингибирующей активности относительно сериновых протеаз аллергенов.

Цель второй части исследования состояла в демонстрации отсутствия взаимодействия между человеческим иммуноглобулином Е и овомукоидами из перепелиных яиц, что позволяет сделать вывод о влиянии овомукоидов на экзогенные протеазы серина, образуемые аллергенами, без воздействия на иммунную систему.

Как было показано в предыдущем разделе, овомукоиды вызывают ингибирующее действие на активность сериновых протеаз, находясь в активном центре фермента и блокируя доступ к IgЕ. Это обосновывает использование овомукоида в качестве терапии для лиц с аллергическими заболеваниями.

Для доказательства отсутствия непосредственного влияния овомукоида на IgЕ, а подтверждения воздействия исключительно на аллерген, выступая в качестве барьерного механизма, проведено дополнительное исследование при различных молярных соотношениях овомукоида (1:1, 1:5 и 1:50).

Взаимодействие исключалось путем проведения специфического теста по методу многослойного твердофазного иммуноферментного анализа (sandwich ELISA) для обнаружения человеческого IgE. Анти-IgE были предварительно адсорбированы в многолуночную пластину; после инокуляции с IgE и овомукоидом в течение часа при 37°C было добавлено детектирующее антитело для обнаружения захваченных IgE с помощью колориметрической реакции. Поглощение окрашенного продукта при длине волны 450 нм, пропорционально количеству человеческого IgE, присутствующего в образце. Если овомукоид не взаимодействует непосредственно с IgE, должен сохраниться высокий уровень IgE, связанного с анти-IgE. Для того чтобы исключить перекрестное взаимодействие между исследуемыми растворами и инструментами, была выполнена эталонная инкубация в качестве отрицательного контроля. Каждый тест был повторен трижды.

Уровень несвязанного IgE остаётся примерно равным 100%, а это означает, что овомукоиды не связываются с IgE. Эти результаты подтверждают, что овомукоиды взаимодействуют с экзогенными сериновыми протеазами аллергенов, не препятствуя иммунной системе.

Рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование по изучению эффективности применения БАД на основе овомукоида перепелиных яиц при аллергическом рините.

Исследование проводилось с 20 июня 2013 г. по 26 октября 2013 г. в калифорнийском медицинском центре в соответствие с Хельсинкской Декларацией и с требованиями Надлежащей Клинической Практики (ICH-GCP). Исследование было одобрено Этическим комитетом.

  • Исследуемая популяция

    В исследование приняли участия 43 пациента от 20 до 58 лет с симптомами АР, при которых не требуется ежедневная медикаментозная терапия, с показателями пиковой скорости инспираторного носового потока (PNIF) более 100 л/мин (среднее по трём показателям), а также со снижением скорости инспираторного носового потока >30 л/мин после воздействия аллергенов. Все пациенты были разделены на 2 группы, первая из которых получала жевательные таблетки с плацебо, вторая — с овомукоидом.

    Основными критериями исключения были обострения хронических заболеваний, сердечно-сосудистые заболевания, заболевания дыхательных путей, постоянное использование антигистаминных средств (более трёх раз в неделю) и известная гиперчувствительность к ингредиентам исследуемой БАД. Все испытуемые подписали форму информированного согласия.

  • Дизайн исследовани

    Основной измеряемой величиной был показатель PNIF, использовавшийся в качестве индикатора заложенности носа. Вторичными считались носовые и глазные симптомы, которые оценивали с помощью визуальной аналоговой шкалы (VAS), а также общее содержание в крови IgE.

    Исследование состояло из трёх осмотров с промежутком в минимум 7 дней: осмотр 1 (скрининг) на −7 день, осмотр 2 (ТЕСТ 1) в 0 день, а также осмотр 3 (ТЕСТ 2 — окончание исследования) на 7 день.

    Всем включенным пациентам проводилась провокация причинно-значимым аллергеном путем впрыскивания стандартной дозы аллергена 10,000 БАЕ/мл (БАЕ — биоэквивалентная аллергенная единица) комбинации аллергенов, в аэрозольной форме

    Визит 1 включал в себя сбор демографических данных, анамнеза, сопутствующей терапии, а также физикальный осмотр, определение жизненно-важных показателей, антропометрию, провокацию аллергенами. В качестве объективной и субъективной оценки симптомов АР проводилось измерение PNIF и оценка симптомов пациентами с помощью шкалы VAS (до воздействия аллергенов, а также через 10, 20, 30, 45 и 60 минут после воздействия).

    В ходе визитов 2 и 3 были проведены оценка жизненно-важных показателей, провокация аллергенами, распределение исследуемой добавки. Измерение PNIF и оценка по шкале VAS регистрировались до воздействия добавки и через 0 мин, 15 мин, 30 мин, 60 мин, 90 мин и 120 мин после воздействия. Во время визита 2 проводилась лабораторная оценка, включающая определение содержания IgE в крови, общий анализ крови. В лабораторную оценку в ходе визита 3 также включался общий анализ крови, образцы крови были забраны до воздействия антигена и через 120 минут после него.

Результаты и выводы

Исследование показало значительные снижения показателей PNIF, с последующим постепенным повышением к 120 минуте в обеих исследуемых группах. Во все отрезки времени после воздействия аллергенов показатели PNIF в группе исследуемой БАД были выше по сравнению с группой плацебо, что подтверждает эффективность исследуемого продукта. Наибольшее различие было отмечено через 15 минут (116,16 л/мин против 110,16 л/мин в группе плацебо) после провокации, что указывает на быстрый эффект при приёме исследуемого продукта с немедленным снижением интенсивности симптомов, вызванных аллергенами (рис. 2). В обеих группах параметр PNIF вернулся к исходному уровню в течение 120 минут.

СнизТоп
Рисунок №2. Динамика пиковой скорости инспираторного потока (PNIF) в группе исследуемой БАД и плацебо (n=43, p=0,0107)

При анализе результатов исследования было обнаружено значительное различие в показателе PNIF в период от 0 до 120 минут после воздействия (p=0,0107). Средние показатели PNIF составили 121,7 против 117,6 в исследуемой и плацебо группах, соответственно. Сравнительный анализ показал тенденцию к изменению значения параметра через 15 минут после воздействия. При анализе данных, полученных в разные промежутки времени, было отмечено достоверное различие через 15 минут после воздействия (р=0,0235).

При сравнении различий в показателях PNIF результаты выражались в процентах от исходного значения, и через 15 минут после воздействия приём активного продукта приводил к 18% улучшению по сравнению с плацебо.

Применение БАД привело к значительному улучшению самооценки состояния испытуемыми по сравнению с группой пациентов, принимавших плацебо. Результаты по аналоговой визуальной шкале (VAS) показали изменения по следующим симптомам, связанным с аллергией: заложенность носа (р=0,0002), риноррея (р=0,0001), слезотечение (р=0,029), зуд в глазах (р=0,006) и зуд в носу (р=0,009). Не было отмечено достоверных отличий по параметру «чихание» (р=0,5340) (рис. 3).

СнизТоп
Рисунок №3. сравнение выраженности клинических проявлений аллергического ринита в течении 120-минутного периода после приема исследуемой БАД и плацебо (n=43) [13]

Не было отмечено статистически значимых различий в общем содержании IgE в активной и плацебо группах как до воздействия (р=0,272), так и через 120 минут после него (р=0,250) (таблица 1). С учётом данных результатов можно сделать вывод об отсутствии влияния активного продукта на уровни антител IgE.

В ходе исследования БАД была признана безопасной и хорошо переносимой, не было зарегистрировано нежелательных явлений. Жизненно-важные показатели (артериальное давление, пульс, температура тела, частота дыхания) оценивались в ходе каждого осмотра, до воздействия аллергенами и применения БАД, общий клинический анализ крови был сделан до провокации и через 120 минут после нее. В обеих группах не было обнаружено клинически значимых различий как по жизненно-важным показателям, так и по результатам лабораторных исследований.

Заключение

По итогам анализа данных доклинических и клинических исследований, можно сделать вывод об эффективности применения БАД на основе овомукоида перепелиных яиц в комплексной терапии АР. Так, в исследованиях in vitro получены убедительные доказательства снижения реактивной чувствительности на экспрессирующие сериновые протеазы аллергены, что, в свою очередь, блокирует гипертрофированную аллергическую реакцию.

Доказательства, полученные в результате исследования взаимодействия с IgE, позволяют прийти к заключению, что овомукоиды из перепелиных яиц блокируют сериновые протеазы аллергенов до начала цепной реакции аллергии, то есть выступают в качестве защитного барьера против экзогенных аллергенов, абсорбированных организмом.

Данный факт получил подтверждение в ходе клинического исследования с участием пациентов с АР. Кратковременное пероральное назначение биологически активной добавки на основе овомукоида приводило к улучшению носового дыхания (по данным PNIF), а также к ослаблению иных симптомов аллергии. При этом достоверных изменений уровня IgE обнаружено не было. Исследуемый продукт был признан безопасным и легко переносимым, во время исследования не было зарегистрировано нежелательных явлений.

На сегодняшний день подобные пищевые добавки зарегистрированы в США и странах Западной Европы. На отечественном фармацевтическом рынке уникальной добавкой на основе овомукоида из перепелиных яиц является СниЗтоп.

Несмотря на регистрационный статус в качестве БАД, представленная в обзоре информация свидетельствует о наличии доказательной базы об эффективности и безопасности продукта.

Перспективы применения СниЗтоп связаны с перечисленными в статье особенностями фармакологической активности и безопасности БАД.

Учитывая быстрое наступление эффекта, СниЗтоп может применяться для предотвращения развития, а также для содействия купированию уже возникших симптомов АР сразу после контакта с аллергеном.

При этом достойный профиль безопасности БАД делает возможным курсовое применение добавки в периоды длительного вынужденного контакта с причинно-значимым аллергеном с профилактической целью.

Это позволяет рекомендовать СниЗтоп для применения в клинической практике в качестве вспомогательной терапии пациентов с различными вариантами сезонного АР (поллиноза) в период активного пыления растений и круглогодичного АР при сенсибилизации бытовыми аллергенами (домашняя пыль, клещевые и грибковые аллергены) и аллергенами животных при невозможности избежать взаимодействия с ними.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

  1. Гущин И. С., Ильина Н. И., Польнер С. А. Аллергический ринит: пособие для врачей. М.: ГНЦ Институт иммунологии МЗ РФ, РААКИ, 2002. 68 с.
  2. Ильина Н. И. Эпидемиология аллергического ринита // Рос. ринол. - 1999. - №1. - С. 23-24.
  3. Landback B. Epidemiology of rhinitis and asthma// Clin Exp Allergy. 1998; Vol. 28 (Suppl2): 3–10.
  4. Ring, J., C. Akdis, H. Behrendt, R. P. Lauener, G. Schappi, M.Akdis, et al. Davos declaration: allergy as a global problem// Allergy. 2012; 67:141–143.
  5. Bousquet, J., N. Khaltaev, A. A. Cruz, J. Denburg, W. J. Fokkens, A. Togias, et al. Allergic Rhinitis and its Impact on Asthma (ARIA) 2008 update (in collaboration with the World Health Organization, GA(2)LEN and AllerGen)// Allergy. 2008; Vol. 63(Suppl. 86):8–160.
  6. Пампура А.Н., Тренева М.С. Cовременная концепция лечения аллергического ринита у детей// Леч врач – 2004. №3.- С. 25-29
  7. Сидоренко И.В. Лечение аллергического ринита // Леч врач – 2003. - №8. – С. 36-42
  8. Гущин И. С. Антигистаминные препараты: пособие для врачей. М.: РААКИ, 2000. 55 с.
  9. Truffier, J. C. Approche therapeutique de la maladie allergique par ingestion d’oeufs de caille// La Clinique. 1978; 22:2–4.
  10. Feeney, R. E., G. E. Means, and J. C. Bigler. Inhibition of human trypsin, plasmin, and thrombin by naturally occurring inhibitors of proteolytic enzymes.// J. Biol. Chem. 1969; 244:1957–1960.
  11. Prelipcean (Teusan), A., A. Prelipcean, and V. Teusan. Investigations on the structure, chemical composition and caloricity of the quail eggs, deposited at the plateau phase of the laying period// Lucrari Stiintifice – Seria Zootehnie. 2012; 57:113–120.
  12. CIM [Unpublished] Study: Proof of concept study on the measure of the inhibitory effect of quail ovomucoids on the activity of serine proteases from allergens. February 6th and 7th, 2014 ALAXIA SAS Bâtiment Adenine 60 Avenue Rockeffeler F-69008 Lyon.
  13. CIM [Unpublished] Study: Determination of the absence of interaction between human IgE and ovomucoids January 28th and 29th, 2014 CERB Chemin de Montifault F-18800 Baugy.
  14. Benichou A-C., Armanet M., Bussiere A., Chevreau N., Cardot J-M., Tetard J. A proprietary blend of quail egg for the attenuation of nasal provocation with a standardized allergenic challenge: a randomized, double-blind, placebo-controlled study// Food Sci Nutr. 2014; Nov 20;2(6):655-63.
БАД. Не является лекарственным средством
С информацией ознакомлен(а), скрыть